上海氣相色譜儀利用氣相色譜層析技術(shù)做為微生物診斷的工具已成功地用于微生物的分類和鑒定。該法敏感性強(qiáng),能夠分離和檢測到毫微克的水平。上海氣相色譜儀具有快速的特點(diǎn),常在數(shù)十分鐘甚至數(shù)小時(shí)就可以對傳染病做出早期診斷。其結(jié)果穩(wěn)定,重復(fù)性好,但不足之處是操作中各因素不易控制,方法不易標(biāo)化等。
上海氣相色譜儀的基本部件(層析柜)
1.譜柱及加熱爐色譜柱一般由金屬或玻璃制成,通常采用的柱長2m~4m,內(nèi)徑2mm, 毛細(xì)管柱長度可達(dá)20m~150m,內(nèi)徑為0.2mm。
2.載氣上海氣相色譜儀常用的載氣主要有氮、氬、氫和二氧化碳等。這些氣體一般都由高壓氣瓶供給。
上海氣相色譜儀載體一般采用惰性、多孔的固體顆粒。多由硅藻土或玻璃珠制成,分析不同極性的微生物化合物,為了獲得zui適的分離條件,上海氣相色譜儀要求有不同固定相的載體。目前比較常用的載體有:聚乙二醇(CarbOwax 20M)、F F A P(聚乙二醇20M和2-硝基對苯二甲酸的反應(yīng)產(chǎn)物),OV—17(苯基甲基硅酮)。OV-210、SE-30(甲基硅酮)、Chromosorb G(白色硅藻土載體)等。上海氣相色譜儀柱加熱爐在溫度控制上是非常重要的。
3.上海氣相色譜儀進(jìn)樣器可以用于分離固相、氣相和液相標(biāo)本。液相標(biāo)本采用微升注射器穿過橡皮隔片注入,上海氣相色譜儀氣相標(biāo)本采用特種氣相注射器注入。
4. 紀(jì)錄儀
5. 數(shù)據(jù)處理裝置上海氣相色譜儀一般均附有數(shù)據(jù)處理計(jì)算機(jī)。
上海氣相色譜儀試驗(yàn)條件的選擇
1.柱溫選擇上海氣相色譜儀柱溫選擇對分離度影響很大,常是條件選擇的關(guān)鍵。選擇的基本原則是:在使zui難分離的組分有盡可能好的分離高度的前提下,上海氣相色譜儀盡可能采取較低溫度,但以保留時(shí)間適宜及不拖尾為度。
?、?高沸點(diǎn)混合物(200℃~400℃),若需在較低的柱溫下分析,
上海氣相色譜儀可采用低固定液配比1%~3%,采用高靈敏檢測器,柱溫可比沸點(diǎn)低100℃~150℃,在200℃~250℃的柱溫下分析。
?、?上海氣相色譜儀沸點(diǎn)<300℃的樣品,可用3%~25%固定液配比。沸點(diǎn)越低,所用配比越高,柱溫可比平均沸點(diǎn)低50℃至平均沸點(diǎn)的范圍選擇。
2.載體選擇 載體采用低線速時(shí),宜用氮?dú)?;高線速時(shí)用氫氣。柱越長,上海氣相色譜儀柱內(nèi)有較大壓力降,宜用氫氣。載氣采用低線速時(shí)為20ml~80ml/min。
3.上海氣相色譜儀色譜柱的選擇 要注意極性及zui高使用溫度,柱溫不能超過zui高使用溫度。上海氣相色譜儀固定相按極性相似的原則選擇。
色譜柱的內(nèi)徑大小、長度都能影響分離率。一般而言,內(nèi)徑越小,長度越長,分離效果越好,上海氣相色譜儀一般柱長為1m~5m(毛細(xì)管柱則20m~100m)。
上海氣相色譜儀填充劑顆粒一般采用40目~60目,60目~80目及80目~100目大小。上海氣相色譜儀長柱子宜用粒度大些的,以減少柱壓降,短柱子則用粒度細(xì)的。
氣相色譜中固定液的含量對分離效率的影響較大。上海氣相色譜儀一般采用固定液與載體重量之比為15︰100~25︰100。采用高靈敏度的檢測器,上海氣相色譜儀由于進(jìn)樣量減少,固定液含量可以降至5︰100以下。這樣可以使用較低柱溫,從而提高柱效,縮短分析時(shí)間。上海氣相色譜儀但固定液用量太少會(huì)引起吸附。
4.上海氣相色譜儀其它條件
⑴ 氣化室溫度及檢測室溫度選擇:氣化溫度取決于樣品的揮發(fā)性、沸點(diǎn)、穩(wěn)定性以及進(jìn)樣量,一般選擇稍高于樣品沸點(diǎn),上海氣相色譜儀但不要超過沸點(diǎn)50%以上,以防分解。檢測室溫度需高于柱溫,一般高于柱溫30℃左右或與氣化室同溫。
?、?上海氣相色譜儀進(jìn)樣量:固定相在配比15%~35%的層析柱時(shí),zui大進(jìn)樣量液體為10μl,氣體為10ml。一般樣品量液體4μl,氣體為0.5ml~3ml,固體小于1mg。
?、?上海氣相色譜儀橋電位選擇:散熱多和選擇大的橋電位,在靈敏度相同的情況下,應(yīng)盡量選擇低橋電位,上海氣相色譜儀以保護(hù)熱敏元件。
上海氣相色譜儀層析是一種分離分析的方法,因此上海氣相色譜儀的特點(diǎn)是適合于多組分混合物的定性和定量分析。
1.定性上海氣相色譜儀對于一已知范圍的混合物,用此法定性很容易,但對于范圍未知的混合物來說,上海氣相色譜儀則需要配合化學(xué)分析及其它儀器分析等。
?、?利用保留值定性法:上海氣相色譜儀同一種物質(zhì)在一根層析柱上保留時(shí)間相同。取樣品各可能組分的純物質(zhì)加入樣品中,混合進(jìn)樣,對此上海氣相色譜儀加入后的色譜圖,若某色譜峰相對譜高,則該色譜峰的組分與純物質(zhì)可能為同一物質(zhì)。
?、?化學(xué)反應(yīng)定性法:即把色譜柱的流出物,上海氣相色譜儀通過官能團(tuán)試劑中,觀察試劑的顏色是否發(fā)生變化或是否有沉淀,上海氣相色譜儀而判斷該組分含什么官能團(tuán)或?qū)儆诤晤惢衔铩?/div>
⑶ 上海氣相色譜儀兩譜聯(lián)用定性法:即利用質(zhì)譜儀、紅外分光光度計(jì)等來進(jìn)行測定,定性。
2.定量 在實(shí)驗(yàn)條件恒定時(shí),峰面積或峰高與組分的含量成正比,因此可以利用峰面積或峰高面積或峰高來進(jìn)行定量。上海氣相色譜儀對于微生物標(biāo)本的氣相色譜分析常根據(jù)以下幾點(diǎn)來進(jìn)行比較。
?、?上海氣相色譜儀峰的有無和峰的大小。
?、?按10個(gè)重復(fù)標(biāo)本分析計(jì)算的平均t值(標(biāo)準(zhǔn)差)。
?、?同標(biāo)準(zhǔn)化合物的相對保留時(shí)間進(jìn)行對比,上海氣相色譜儀而對某化合物做出鑒定。